Séquençage de plasmides complets
Nous proposons le séquençage complet et assemblage de novo de vos plasmides (insert et/ou vecteur) grâce aux technologies de séquençage haut-débit.
Les avantages sont :
- Faible quantité d’ADN de départ à fournir.
- Pas de nécessité d’oligonucléotides spécifiques pour le séquençage.
- Coût de séquençage plus avantageux que le séquençage Sanger traditionnel (à partir de 3kb).
Préparez vos échantillons comme suit :
1- Concentration et QC au Nanodrop :
- Le rapport 260/280 doit être compris entre 1,7 et 1,9 maximum.
- Le rapport 260/230 doit être compris entre 1,6 et 2,3 de préférence.
- Idéalement, la concentration initiale avant dilution doit être supérieure à 50 ng/µl.
- Assurez vous de l’intégrité de votre préparation d’ADN (vérification sur gel)
2 – Soumission des échantillons
- Conditionnez vos échantillons en barrette (éventuellement en tube de 0,2ml si vous n’avez qu’un échantillon).
- 165 ng de matrice dans un volume final de 15µl (H2O DNAse free)
3 – Annotation des échantillons
- Numérotez les tubes des barrettes (au moins le premier et le dernier tube de la barrette).
- Indiquez vos identifiants sur les bouchons selon la syntaxe suivante : numéro de laboratoire –initiales de l’utilisateur – nombre d’échantillons (exemple : 406-AM-10).
4 – Déposez vos barrettes dans la boîte « FLPS » se trouvant dans le tiroir de dépôt des échantillons à séquencer – Congélateur de la plateforme.
5 – Remplissez correctement le formulaire et renvoyer le à aeg@ibmp-cnrs.unistra.fr
! Note importante !
Chaque nom d’échantillon doit commencer par vos initiales. Ne mettre que des lettres, des chiffres, des tirets et des underscores dans les noms (pas d’espaces, pas de parenthèses ni aucun autre caractère spécial).
Ne pas donner le même nom à 2 échantillons différents.